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| 项目介绍 |
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TILLING（Targeting Induced Local Lesions IN Genomes）是后基因组时代反向遗传学研究的一个重要手段，该技术结合了大规模诱变群体的建立和目的基因突变的高通量检测。水稻既是单子叶植物研究的模式物种，又是重要的粮食作物，因此水稻TILLING平台的建立对于理论研究（揭示基因功能）和实践应用（育种）均有重要价值。尽管国际上已有数个水稻TILLING平台，但其获得的突变体数量均较少，且仅有1个平台能够进行对外服务，不能满足全球用户对水稻功能研究的需求。鉴于此，我们建立了一个和高效的水稻TILLLNG平台。
本水稻TILLING平台以粳稻品种中花11号的种子为材料、以EMS为诱变剂，建立了包含11,925份M2代植株的大规模诱变群体，挑选其中6000份M2代植株用于目前的TILLING筛选。我们将M2代单株的基因组DNA等量混合成8倍样品池并以此为模板进行目的片段的PCR扩增，扩增产物经CEL I酶切后用Fragment Analyzer™自动毛细管电泳系统进行突变检测。本水稻TILLING平台的工作流程详见图1。利用该平台对数十个目的基因进行的TILLING筛选共得到了数百个个突变，群体的突变频率约为每400 kb基因组DNA产生1个突变，相当于每个1.5 kb目的片段在EMS群体中进行筛选能够得到约10个以上突变。与已发表的水稻TILLING平台相比，本平台能够得到单位长度目的片段更多的突变。
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